Plasmide Double Nickase (h) MTBP: sc-404307-NIC

La protéine de liaison à Mdm2 (MTBP) est un facteur nucléaire impliqué dans le contrôle de l’initiation de la réplication de l’ADN et de la progression de la phase S, via des interactions avec des protéines de la réplication telles que Treslin/TICRR et CDC45, soutenant l’activation des origines et la stabilité du génome. MTBP intervient également dans les voies de signalisation des points de contrôle du cycle cellulaire et de la réponse au stress, reliant la dynamique de la réplication au contrôle de la prolifération. Une expression dérégulée de MTBP a été associée à une tolérance modifiée au stress de réplication et à une instabilité chromosomique observées dans de multiples contextes tumoraux, ce qui en fait un locus utile pour étudier les voies qui couplent la réplication de l’ADN aux programmes de croissance oncogénique. L’étude fonctionnelle de MTBP renseigne sur les mécanismes régissant le calendrier de réplication, la signalisation des dommages à l’ADN et la fidélité mitotique dans les cellules humaines.

MTBP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MTBP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MTBP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MTBP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MTBP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.