Plasmide CRISPR d'Activation (h) Msx-2: sc-403657-ACT

Le gène humain **MSX2** code le facteur de transcription à homéoboîte **Msx-2**, un régulateur nucléaire qui intègre les signaux du développement afin de contrôler les décisions de destinée cellulaire, ainsi que les programmes de prolifération et de différenciation. Msx-2 agit en aval des voies **BMP/TGF-β** et interagit avec les voies **Wnt** et **FGF** pour coordonner les interactions épithélio-mésenchymateuses, la mise en place des structures craniofaciales et des membres, la différenciation ostéogénique et le développement dentaire. Une activité dérégulée de MSX2 a été associée à une formation osseuse aberrante et à des phénotypes craniofaciaux, et une expression modifiée est rapportée dans des contextes impliquant un remodelage tissulaire anormal et l’engagement de lignée. En tant que répresseur/activateur transcriptionnel selon les cofacteurs, Msx-2 est fréquemment étudié pour son impact sur l’état de la chromatine et sur les réseaux géniques en aval qui gouvernent la morphogenèse.

Msx-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MSX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Msx-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MSX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MSX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Msx-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MSX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Msx-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Msx-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MSX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.