Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP6 (h): sc-402219

Présentation

ABCC6 code le transporteur de la cassette de liaison à l’ATP MRP6, une pompe d’efflux de la membrane plasmique principalement exprimée dans le foie et le rein, qui régule l’homéostasie extracellulaire des nucléotides et des métabolites. L’activité de MRP6 influence la signalisation purinergique et l’équilibre du pyrophosphate inorganique, reliant la fonction du transporteur à des voies qui contrôlent la minéralisation ectopique et l’intégrité des tissus conjonctifs. Des variants perte de fonction d’ABCC6 sont associés au pseudoxanthome élastique et à des phénotypes de calcification apparentés, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du remodelage de la matrice extracellulaire, de la calcification vasculaire et de la biologie des transporteurs spécifiques des tissus. Les modèles ABCC6/MRP6 permettent également d’explorer le trafic des transporteurs ABC, le transport de substrats dépendant de l’ATP et les voies compensatoires au sein des protéines de résistance multidrogue.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ABCC6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ABCC6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ABCC6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MRP6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ABCC6 pour l'étude de la signalisation de MRP6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ABCC6 essentiels à la fonction de MRP6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ABCC6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MRP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MRP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ABCC6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MRP6 plasmide HDR (h) et le MRP6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ABCC6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ABCC6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.