MRP5 Double Nickase Plasmid (h): sc-402443-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MRP5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MRP5 Double-Nickase-Plasmid (h) und MRP5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ABCC5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MRP5: sc-376965
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MRP5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402443-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MRP5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402443-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCC5 kodiert den menschlichen ATP-bindenden Cassette-Transporter MRP5, eine Effluxpumpe in der Plasmamembran, die organische Anionen exportiert, darunter zyklische Nukleotide (cGMP und cAMP) sowie verschiedene Nukleotidanaloga. Durch die Regulation intrazellulärer Pools zyklischer Nukleotide moduliert MRP5 die Second-Messenger-Signalübertragung mit nachgeschalteten Effekten auf die Proteinkinaseaktivität, die Regulation von Ionenkanälen und Transkriptionsprogramme, die die Zellproliferation und Stressantworten beeinflussen. Die ABCC5-Aktivität ist in Pharmakologie und Toxikologie relevant, da sie die zelluläre Handhabung von Xenobiotika und Antimetaboliten verändert; eine Fehlregulation wurde zudem mit Phänotypen der Multidrug-Resistenz und krebsassoziierten Signalkontexten in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen ABCC5/MRP5 zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung der Transporterbiologie, der Homöostase zyklischer Nukleotide und der Mechanismen der Substanzempfindlichkeit.
MRP5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ABCC5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ABCC5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ABCC5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ABCC5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.