MRP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402443

Übersicht

ABCC5 kodiert den humanen ATP-bindenden Kassetten-Transporter MRP5 (ABCC5), eine membranständige Effluxpumpe, die unter Nutzung der ATP-Hydrolyse eine Reihe organischer Anionen exportiert, darunter zyklische Nukleotide wie cGMP, sowie weitere Metabolite, die die intrazelluläre Signalübertragung beeinflussen. Durch die Regulation zytosolischer Nukleotidpools und den Umgang mit Xenobiotika ist MRP5 in Prozesse eingebunden, die mit Membrantransport, Redox-Gleichgewicht und zellulären Stressantworten verknüpft sind. Eine veränderte ABCC5/MRP5-Aktivität wurde mit Änderungen in Arzneistoff-Dispositionsphänotypen sowie mit krankheitsrelevanten Programmen in Verbindung gebracht, die Proliferation und Überleben in verschiedenen Geweben betreffen. Daher wird ABCC5 häufig in Signalwegen untersucht, die transportvermittelte Homöostase mit der Regulation von Zellzuständen verbinden.

Das MRP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ABCC5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ABCC5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ABCC5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MRP5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ABCC5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MRP5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ABCC5-Exone abzielen, die für die MRP5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ABCC5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MRP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MRP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ABCC5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MRP5 HDR-Plasmid (h) und MRP5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ABCC5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ABCC5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.