Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP5 (h): sc-402443

Présentation

ABCC5 code le transporteur humain de la cassette de liaison à l’ATP MRP5 (ABCC5), une pompe d’efflux membranaire qui utilise l’hydrolyse de l’ATP pour exporter divers anions organiques, notamment des nucléotides cycliques tels que le cGMP, ainsi que d’autres métabolites influençant la signalisation intracellulaire. En régulant les pools cytosoliques de nucléotides et la prise en charge des xénobiotiques, MRP5 s’inscrit à l’interface de processus liés au transport membranaire, à l’équilibre redox et aux réponses cellulaires au stress. Une activité ABCC5/MRP5 altérée a été associée à des modifications des phénotypes de disposition des médicaments ainsi qu’à des programmes pertinents pour des maladies impliquant la prolifération et la survie dans de multiples contextes tissulaires. Par conséquent, ABCC5 est fréquemment étudié dans des voies reliant l’homéostasie médiée par le transport à la régulation de l’état cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ABCC5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ABCC5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ABCC5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MRP5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ABCC5 pour l'étude de la signalisation de MRP5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ABCC5 essentiels à la fonction de MRP5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ABCC5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MRP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MRP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ABCC5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MRP5 plasmide HDR (h) et le MRP5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ABCC5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ABCC5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.