MRP-L18 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409905-ACT

MRPL18 kodiert das menschliche mitochondriale Ribosomenprotein MRP-L18, eine Komponente der großen Untereinheit des 55S-Mitoribosoms, die für die Translation mitochondrial kodierter Untereinheiten der oxidativen Phosphorylierung (OXPHOS) erforderlich ist. Durch die Unterstützung der mitochondrialen Proteinsynthese trägt MRP-L18 zur Biogenese der Atmungskette, zur zellulären Atmung, zur ATP-Produktion sowie zur nachgeschalteten Redox- und metabolischen Homöostase bei. Störungen an mitoribosomalen Proteinen werden breit mit Phänotypen einer mitochondrialen Dysfunktion in Verbindung gebracht, darunter veränderte Bioenergetik, Stresssignalgebung und beeinträchtigte Programme der mitochondrialen Genexpression, wie sie in unterschiedlichen krankheitsrelevanten Kontexten beobachtet werden.

MRP-L18 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MRPL18-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MRP-L18 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MRPL18-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MRPL18-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MRP-L18-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MRPL18-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MRP-L18-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MRP-L18-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MRPL18-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.