Plásmido CRISPR de Activación (h) MRGX2: sc-414107-ACT

MRGPRX2 codifica el receptor humano X2 relacionado con Mas acoplado a proteína G (MRGX2), un GPCR altamente enriquecido en mastocitos que media la activación independiente de IgE en respuesta a diversos péptidos catiónicos y moléculas pequeñas. La unión al receptor desencadena la señalización Gαq/PLC, la movilización de Ca2+ intracelular y programas transcripcionales posteriores vinculados a MAPK y NF-κB, que modulan la desgranulación y la liberación de mediadores proinflamatorios. MRGX2 se ha implicado en la comunicación neuroinmunitaria y en reacciones seudoalérgicas, y su desregulación se estudia en el contexto de la urticaria crónica, la inflamación atópica y respuestas inmediatas tipo hipersensibilidad inducidas por fármacos. Estas propiedades hacen de MRGPRX2 un nodo útil para investigar los umbrales de activación de los mastocitos, la señalización sesgada del receptor y el crosstalk entre vías inflamatorias.

MRGX2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MRGPRX2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MRGX2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MRGPRX2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MRGPRX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MRGX2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MRGPRX2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MRGX2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MRGX2 en células tumorales con expresión de MRGPRX2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.