MRGX2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-414107-ACT

MRGPRX2 は、ヒトの Mas 関連 G タンパク質共役受容体 X2（MRGX2）をコードする遺伝子であり、肥満細胞に高度に発現する GPCR です。多様なカチオン性ペプチドや低分子に応答して、IgE 非依存的な活性化を媒介します。受容体が活性化されると、Gαq/PLC シグナル伝達、細胞内 Ca2+ 動員が誘導され、さらに MAPK および NF-κB に連関した転写プログラムが下流で作動して、脱顆粒や炎症性メディエーター放出の様式を規定します。MRGX2 は神経—免疫間コミュニケーションや偽アレルギー反応に関与するとされ、その制御異常は慢性蕁麻疹、アトピー性炎症、薬剤誘発性の即時型過敏反応様応答といった文脈で研究されています。これらの特性により、MRGPRX2 は肥満細胞の活性化閾値、受容体のバイアスド・シグナリング、炎症経路間のクロストークを解析するうえで有用な結節点となります。

MRGX2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MRGPRX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MRGX2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MRGPRX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMRGPRX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MRGX2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMRGPRX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMRGX2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMRGPRX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMRGX2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。