MRG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421714

Übersicht

Cited2 kodiert den transkriptionellen Ko‑Regulator MRG1, ein nukleäres Protein, das an CBP/p300 bindet und Genexpressionsprogramme moduliert, die in Mauszellen Proliferation, Differenzierung und zelluläre Stressantworten steuern. Durch die Integration von Signalen hypoxie‑responsiver und entwicklungsbezogener Transkriptionsfaktoren beeinflusst MRG1 HIF‑abhängige transkriptionelle Outputs sowie eine umfassendere, chromatinvermittelte Regulation der Linienfestlegung. Die Aktivität von Cited2 ist mit Embryogenese und Organogenese verknüpft, und eine veränderte Regulation dieses Signalwegs wurde mit Defekten in der kardiovaskulären und hämatopoetischen Entwicklung in Zusammenhang gebracht. Als kontextabhängiger Regulator transkriptioneller Netzwerke wird Cited2 häufig in Modellen für Entzündung, metabolischen Stress und Tumorbiologie untersucht, in denen die Verfügbarkeit von Ko‑Aktivatoren und hypoxische Signalgebung Zellschicksalsentscheidungen prägen.

Das MRG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cited2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cited2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cited2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MRG1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cited2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MRG1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cited2-Exone abzielen, die für die MRG1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cited2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MRG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MRG1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cited2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MRG1 HDR-Plasmid (m) und MRG1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cited2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cited2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.