mPRα CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402143-ACT

PAQR7 kodiert den membranständigen Progesteronrezeptor alpha (mPRα), ein Mitglied der PAQR-Familie, das mit schneller, nicht-genomischer Progesteron-Signalübertragung an Zellmembranen in Verbindung gebracht wird. mPRα wurde mit der Modulation G‑Protein-gekoppelter Signalwege verknüpft, einschließlich der cAMP-Dynamik und nachgeschalteter Kinasewege, die Programme der Zellproliferation, Differenzierung und des Überlebens beeinflussen. In menschlichen Geweben ist die PAQR7-Expression mit endokriner Regulation und steroidresponsiven zellulären Zuständen assoziiert, was sie für die Untersuchung hormonabhängiger transkriptioneller Netzwerke und des Cross-Talks membraninitiierter Signalwege relevant macht. Fehlregulierte Progesteron-Signalwege unter Beteiligung von PAQR7 wurden im Kontext der Reproduktionsbiologie und hormonassoziierter Krankheitsmechanismen untersucht, was seine Eignung als Forschungsziel in Studien zur Zellsignalgebung und funktionellen Genomik unterstützt.

mPRα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PAQR7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

mPRα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PAQR7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PAQR7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen mPRα-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PAQR7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von mPRα-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des mPRα-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PAQR7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.