Plasmide CRISPR d'Activation (h) MOG: sc-402717-ACT

La glycoprotéine de l’oligodendrocyte de la myéline (MOG) est une protéine de surface de la myéline du système nerveux central (SNC), enrichie au niveau des prolongements des oligodendrocytes et des lamelles les plus externes de la gaine de myéline, contribuant à l’intégrité de la myéline et aux interactions axone–glie. En tant qu’antigène membranaire très accessible au sein du compartiment myélinique, la MOG est largement utilisée pour étudier la reconnaissance immunitaire de la myéline du SNC ainsi que les mécanismes qui régulent la démyélinisation et la remyélinisation. Des réponses immunitaires dirigées contre la MOG altérées, ainsi que des modifications des programmes géniques associés à la myéline, sont pertinentes pour les maladies démyélinisantes inflammatoires et la pathologie neuro-inflammatoire, ce qui soutient son utilisation dans des études sur la biologie des oligodendrocytes, la présentation d’antigènes et les lésions de la substance blanche. La modulation expérimentale de l’expression de la MOG peut aider à disséquer les voies qui gouvernent le maintien de la myéline, l’activation microgliale et le dialogue neuro-immunitaire.

MOG Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MOG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MOG Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MOG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MOG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MOG. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MOG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MOG au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MOG dans les cellules tumorales présentant une expression de MOG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.