Plasmide CRISPR/Cas9 KO MOBP (m): sc-421685

Présentation

La protéine basique des oligodendrocytes associée à la myéline (MOBP), codée chez la souris par le gène *Mobp*, est un composant structural abondant de la myéline du système nerveux central, produite par les oligodendrocytes matures. MOBP contribue à la compaction et à la stabilité de la myéline et est couramment étudiée dans le contexte de la différenciation des oligodendrocytes, des interactions axone–glie et du maintien de l’intégrité de la substance blanche. L’expression de *Mobp* est associée aux programmes de biogenèse de la myéline ainsi qu’aux processus d’organisation du cytosquelette et des membranes qui soutiennent la formation de la gaine. Des niveaux altérés de MOBP et une perturbation de la myéline sont impliqués dans les mécanismes des maladies démyélinisantes et neurodégénératives, offrant un indicateur de la pathologie de la substance blanche dans des modèles expérimentaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MOBP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mobp dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mobp, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mobp à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MOBP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mobp pour l'étude de la signalisation de MOBP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mobp essentiels à la fonction de MOBP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mobp pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MOBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MOBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mobp. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MOBP plasmide HDR (m) et le MOBP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mobp pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mobp définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.