MMP2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421674-ACT

Das murine Gen *Mmp2* kodiert die Matrix-Metalloproteinase-2 (MMP2), eine zinkabhängige Endopeptidase, die extrazelluläre Matrixkomponenten wie Kollagen Typ IV und Gelatine spaltet und dadurch den Umbau der Basalmembran reguliert. Die MMP2-Aktivität wirkt dabei mit Integrin-Signalen, der Verfügbarkeit von Wachstumsfaktoren sowie Proteasenetzwerken einschließlich TIMPs und der Plasminogen-Aktivierung zusammen und prägt Programme der Zellmigration, Invasion und Gewebereparatur. Aufgrund ihrer Rollen bei angiogenem Remodeling, dem Trafficking entzündlicher Zellen und der stromalen Reorganisation werden veränderte MMP2-Expression oder ein veränderter Aktivierungszustand breit in der Forschung zu Fibrose, Arthritis, Neuroinflammation und der Biologie des Tumormikromilieus untersucht. In Mausmodellen bietet *Mmp2* einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um durch extrazelluläre Proteolyse getriebene Veränderungen in Adhäsion, Mechanotransduktion und Barrierefunktion zu analysieren.

MMP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Mmp2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MMP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Mmp2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Mmp2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MMP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Mmp2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MMP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MMP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Mmp2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.