MMP-11 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404334-ACT

Das menschliche **MMP11**-Gen kodiert die Matrix-Metalloproteinase‑11 (MMP‑11; Stromelysin‑3), eine sekretierte, zinkabhängige Endopeptidase, die die extrazelluläre Matrix umgestaltet und die perizelluläre Proteolyse moduliert. Im Unterschied zu vielen MMPs wird MMP‑11 intrazellulär durch furinähnliche Konvertasen aktiviert und beeinflusst stroma‑epitheliale Interaktionen, Zellmigration sowie Programme der Gewebeumgestaltung, die mit Wundheilung und Entwicklungsprozessen verknüpft sind. Die Aktivität von MMP‑11 überschneidet sich mit der Organisation der extrazellulären Matrix, Integrin‑Signalgebung und der Bioverfügbarkeit von Wachstumsfaktoren und formt dadurch mikroumgebungsabhängige Signale, die Proliferation und invasionsbezogene Phänotypen regulieren. Eine dysregulierte MMP11‑Expression wurde mit Tumor‑Stroma‑Remodeling sowie fibrotischen oder entzündlichen Mikroumgebungen in Verbindung gebracht und macht MMP11 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zur matrixgetriebenen Krankheitsbiologie.

MMP-11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MMP11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MMP-11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MMP11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MMP11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MMP-11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MMP11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MMP-11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MMP-11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MMP11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.