MMP-10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403174-ACT

A metaloproteinase de matriz-10 (MMP-10; estromelisina-2) é uma endopeptidase secretada dependente de zinco que remodela a matriz extracelular ao clivar proteoglicanos, laminina, fibronectina e outros componentes da matriz, e pode ativar MMPs adicionais para amplificar cascatas proteolíticas. Sua atividade influencia a adesão e a migração celular, a dinâmica epitélio–mesênquima e programas de reparo tecidual, integrando sinais extracelulares com a sinalização inflamatória. A expressão de MMP-10 é comumente regulada a jusante de vias de citocinas e fatores de crescimento, incluindo NF-κB e MAPK/AP-1, vinculando-a a contextos de cicatrização de feridas e remodelamento do estroma. A desregulação de MMP-10 tem sido associada ao turnover patológico da matriz observado em diferentes doenças inflamatórias, processos relacionados à fibrose e ao remodelamento do microambiente associado a tumores, apoiando seu uso como marcador mecanístico em modelos relevantes de doença.

MMP-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MMP-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MMP-10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MMP-10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MMP-10 em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.