MLN64 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405166

Übersicht

STARD3 kodiert MLN64, ein spätes endosomales/lysosomales Membranprotein mit einer START-Domäne, die den intrazellulären Cholesterintransport vermittelt. MLN64 trägt zum Steroltransport von Endosomen zu Orten der Steroidogenese und Membranbiosynthese bei und verknüpft damit die endozytotische Lipidverarbeitung mit der mitochondrialen Cholesterinnutzung sowie umfassenderen Netzwerken der Lipidhomöostase. Über Effekte auf die Cholesterinverteilung und die Dynamik von Organellenkontaktstellen greift die STARD3-Aktivität in Signalwege ein, die Membranzusammensetzung, räumliche Kompartimentierung von Signalprozessen und zelluläre Stressantworten steuern. Eine dysregulierte STARD3-Expression wurde mit verändertem Lipidstoffwechsel in Verbindung gebracht und im Kontext proliferativer und metabolischer Phänotypen untersucht, die für die Krebsbiologie und Neurodegeneration relevant sind.

Das MLN64 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des STARD3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des STARD3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von STARD3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MLN64-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von STARD3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MLN64-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf STARD3-Exone abzielen, die für die MLN64-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere STARD3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MLN64 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MLN64 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des STARD3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MLN64 HDR-Plasmid (h) und MLN64 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von STARD3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten STARD3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.