Particules Lentivirales d'Activation (m) MLL3: sc-437348-LAC

Kmt2c code la méthyltransférase murine des lysines d’histones MLL3, un régulateur de la chromatine de type COMPASS qui catalyse la mono‑ et la di‑méthylation de H3K4 au niveau des enhancers afin de façonner les programmes transcriptionnels. MLL3 coopère avec les récepteurs nucléaires et des facteurs de transcription déterminant la lignée pour contrôler l’amorçage des enhancers, la dynamique de l’ARN polymérase II et les décisions d’identité cellulaire au cours du développement et de la différenciation. Par ses effets sur l’accessibilité de la chromatine et les éléments régulateurs à longue distance, MLL3 influence des voies liées au métabolisme, à l’inflammation et aux réponses aux dommages de l’ADN. Une dérégulation de la fonction des enhancers dépendante de Kmt2c/MLL3 est associée à des réseaux d’expression génique altérés observés dans de multiples contextes pertinents pour la maladie, notamment le remodelage épigénétique associé au cancer.

Les particules d'activation lentivirales MLL3 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Kmt2c dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MLL3 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Kmt2c, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MLL3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Kmt2c ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.