MLL2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401659-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MLL2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MLL2 Double-Nickase-Plasmid (h) und MLL2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KMT2D abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MLL2: sc-293217
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MLL2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401659-NIC | 20 µg | $410.00 |
KMT2D (MLL2) kodiert eine Histon-Lysin-Methyltransferase mit SET-Domäne, die vor allem die Mono- und Dimethylierung von H3K4 an Enhancern katalysiert und damit die Transkriptionsinitiation sowie zelltypspezifische Genexpressionsprogramme unterstützt. Als zentraler Regulator der Chromatinzugänglichkeit ist MLL2 in COMPASS-ähnliche Komplexe eingebunden und koordiniert Enhancer-Priming, Festlegung der Zelllinie (lineage commitment) und signalabhängige Transkription über Entwicklungs- und Immunwege hinweg. Eine Störung von KMT2D beeinträchtigt die epigenetische Kontrolle von Differenzierung und DNA-Schadens-reaktiven Transkriptionsnetzwerken und trägt so zu veränderter zellulärer Identität und Genomregulation bei. Genetische und epigenomische Studien haben eine Fehlregulation von KMT2D mit Entwicklungs-Syndromen und vielfältigen, krebsassoziierten Chromatin-Remodeling-Phänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem wichtigen Ziel in der funktionellen Genomik macht.
MLL2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KMT2D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KMT2D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KMT2D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KMT2D-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.