Plásmido CRISPR de Activación (h) MLK4: sc-405976-ACT

MAP3K21 codifica la quinasa humana de linaje mixto 4 (MLK4), una quinasa de serina/treonina de la familia MAP3K que conecta señales ascendentes de estrés y de factores de crecimiento con la señalización MAPK. Se ha implicado a MLK4 en la regulación de las cascadas de quinasas JNK y p38 y de programas celulares más amplios, incluidos la proliferación, la diferenciación y la apoptosis, a través de relés de señalización impulsados por fosforilación. La reorganización alterada de la vía MAPK que involucra a MAP3K21/MLK4 se ha asociado con una señalización celular desregulada observada en múltiples contextos de enfermedad, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para el mapeo de vías y la genómica funcional. Por ello, la modulación experimental de MLK4 es relevante para desentrañar la dinámica de redes de quinasas, las respuestas transcripcionales al estrés y la plasticidad de la señalización dependiente del contexto en células humanas.

MLK4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAP3K21 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MLK4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAP3K21 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAP3K21, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MLK4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAP3K21 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MLK4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MLK4 en células tumorales con expresión de MAP3K21 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.