MLK2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406968-ACT

Das humane MAP3K10-Gen kodiert die Mixed-Lineage-Kinase 2 (MLK2), eine MAP-Kinase-Kinase-Kinase, die vorgelagerte Signale kleiner GTPasen und Stresssignale integriert, um Phosphorylierungskaskaden weiterzuleiten. MLK2 ist ein zentraler Regulator der MAPK-Signalübertragung, insbesondere der JNK- und p38-Wege, und prägt Transkriptionsprogramme, die Apoptose, Entzündungsreaktionen und neuronale Differenzierung steuern. Über diese Signalknoten beeinflusst MLK2 die Zytoskelettdynamik und die zelluläre Stressanpassung – Prozesse, die in der Krebsbiologie und der Neurodegenerationsforschung häufig untersucht werden. Eine fehlregulierte MAP3K10-Aktivität wurde mit aberranter stressaktivierter Signalübertragung und veränderten Überlebenswegen in Verbindung gebracht und ist damit relevant für mechanistische Studien zur Umverdrahtung von Signalwegen.

MLK2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAP3K10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MLK2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAP3K10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAP3K10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MLK2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAP3K10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MLK2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MLK2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAP3K10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.