Plásmido Doble Nickase (m) MLH1: sc-421660-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)MLH1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MLH1 (m) y el plásmido de doble nickasa MLH1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Mlh1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MLH1 Anticuerpo (B-12): sc-271978
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) MLH1 | sc-421660-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) MLH1 | sc-421660-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mlh1 codifica MLH1, un componente central de la maquinaria de reparación de errores de apareamiento del ADN (MMR), que protege la integridad del genoma al corregir desajustes base–base y bucles de inserción–deleción que surgen durante la replicación del ADN. MLH1 actúa dentro de complejos MutL, coordinándose con homólogos de MutS para acoplar el reconocimiento del desajuste a la escisión y la resíntesis, y también participa en la señalización del daño en el ADN y en el procesamiento de intermediarios de recombinación. En células de ratón, la actividad alterada de MLH1 incrementa la mutagénesis asociada a la replicación y la inestabilidad de microsatélites, vinculando los defectos de MMR con fenotipos de inestabilidad genómica ampliamente utilizados en biología del cáncer e investigación de reparación del ADN. En consecuencia, Mlh1 se estudia con frecuencia en vías que regulan la acumulación de mutaciones, las respuestas de control de ciclo (checkpoints) y el mantenimiento del genoma.
MLH1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Mlh1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Mlh1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Mlh1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Mlh1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.