MLF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417753

Übersicht

Myeloid leukemia factor 1 (MLF1) ist ein evolutionär konservierter Regulator des Schicksals hämatopoetischer Zellen, der sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern lokalisiert ist und an Protein-Protein-Interaktionen beteiligt ist, die Transkriptionsprogramme und die Kontrolle des Zellzyklus beeinflussen. MLF1 wurde mit der myeloischen Differenzierung und stressresponsiver Signalübertragung in Verbindung gebracht; beschrieben sind zudem Funktionen bei der Modulation der Apoptoseanfälligkeit und der Proliferationsfähigkeit in bereits linienfestgelegten Zellen. Eine veränderte MLF1-Expression oder Fehl-Lokalisierung wurde mit der Biologie hämatologischer Malignome assoziiert, einschließlich Konstellationen der leukämischen Transformation, in denen Differenzierungs- und Wachstumskontrollpunkte gestört sind. Daher stellt MLF1 einen nützlichen Knotenpunkt dar, um Signalwege zu untersuchen, die Transkriptionsregulation mit Proliferation und Differenzierung in humanen Zellen koppeln.

Das MLF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MLF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MLF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MLF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MLF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MLF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MLF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MLF1-Exone abzielen, die für die MLF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MLF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MLF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MLF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MLF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MLF1 HDR-Plasmid (h) und MLF1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MLF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MLF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.