MKP-1/DUSP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422507

Descripción general

La fosfatasa de doble especificidad 1 (Dusp1), también conocida como MKP-1/DUSP1, es una fosfatasa de MAPK inducible que desfosforila e inactiva ERK1/2, JNK y p38 MAPK para limitar la duración de la señal tras la estimulación por estrés, citocinas y factores de crecimiento. En células de ratón, DUSP1 actúa como un regulador clave de retroalimentación que vincula la actividad de las MAPK con programas transcripcionales que gobiernan la inflamación, la apoptosis, la diferenciación y la adaptación al estrés oxidativo y genotóxico. Mediante la modulación de factores de transcripción dependientes de MAPK y de la producción posterior de citocinas, DUSP1 influye en la señalización de la inmunidad innata y en las respuestas celulares al estrés. La expresión o actividad desregulada de DUSP1 se ha asociado con fenotipos inflamatorios alterados y una señalización MAPK aberrante en contextos que incluyen el estrés metabólico y oncogénico, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para el estudio de vías de señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MKP-1/DUSP1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dusp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dusp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dusp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MKP-1/DUSP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dusp1 para la investigación de la señalización de MKP-1/DUSP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Dusp1 críticos para la función de MKP-1/DUSP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dusp1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MKP-1/DUSP1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MKP-1/DUSP1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dusp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MKP-1/DUSP1 (m) y el plásmido HDR MKP-1/DUSP1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dusp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dusp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.