Plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-1/DUSP1 (m): sc-422507

Présentation

La phosphatase à double spécificité 1 (Dusp1), également connue sous le nom de MKP-1/DUSP1, est une phosphatase des MAPK inductible qui déphosphoryle et inactive les MAPK ERK1/2, JNK et p38 afin de limiter la durée du signal après une stimulation par le stress, des cytokines ou des facteurs de croissance. Dans les cellules de souris, DUSP1 agit comme un régulateur clé de rétrocontrôle reliant l’activité des MAPK à des programmes transcriptionnels gouvernant l’inflammation, l’apoptose, la différenciation et l’adaptation au stress oxydant et génotoxique. En modulant des facteurs de transcription dépendants des MAPK ainsi que la production de cytokines en aval, DUSP1 influence la signalisation de l’immunité innée et les réponses cellulaires au stress. Une expression ou une activité dérégulée de DUSP1 a été associée à des phénotypes inflammatoires modifiés et à une signalisation MAPK aberrante dans des contextes incluant le stress métabolique et oncogénique, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique pour l’étude des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-1/DUSP1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dusp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dusp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dusp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MKP-1/DUSP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dusp1 pour l'étude de la signalisation de MKP-1/DUSP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dusp1 essentiels à la fonction de MKP-1/DUSP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dusp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MKP-1/DUSP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MKP-1/DUSP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dusp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MKP-1/DUSP1 plasmide HDR (m) et le MKP-1/DUSP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dusp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dusp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.