MKP-1/DUSP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422507

Übersicht

Dual-Spezifitätsphosphatase 1 (Dusp1), auch bekannt als MKP-1/DUSP1, ist eine induzierbare MAPK-Phosphatase, die ERK1/2-, JNK- und p38-MAPKs dephosphoryliert und inaktiviert, um die Signaldauer nach Stimulation durch Stress, Zytokine und Wachstumsfaktoren zu begrenzen. In Mauszellen fungiert DUSP1 als zentraler Feedback-Regulator, der die MAPK-Aktivität mit Transkriptionsprogrammen verknüpft, die Entzündung, Apoptose, Differenzierung und die Anpassung an oxidativen und genotoxischen Stress steuern. Durch die Modulation MAPK-abhängiger Transkriptionsfaktoren und nachgeschalteter Zytokinantworten beeinflusst DUSP1 die angeborene Immun-Signalgebung und zelluläre Stressantworten. Eine dysregulierte DUSP1-Expression oder -Aktivität wurde mit veränderten inflammatorischen Phänotypen und aberranter MAPK-Signalübertragung in Zusammenhängen wie metabolischem und onkogenem Stress in Verbindung gebracht, was ihre Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt zur Untersuchung von Signalwegen unterstützt.

Das MKP-1/DUSP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dusp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dusp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dusp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MKP-1/DUSP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dusp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MKP-1/DUSP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Dusp1-Exone abzielen, die für die MKP-1/DUSP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dusp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MKP-1/DUSP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MKP-1/DUSP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dusp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MKP-1/DUSP1 HDR-Plasmid (m) und MKP-1/DUSP1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dusp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dusp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.