Plásmido CRISPR de Activación (h) MKP-1/DUSP1: sc-400243-ACT

DUSP1 codifica la fosfatasa 1 de las quinasas de proteínas activadas por mitógenos (MKP-1), una fosfatasa de doble especificidad que desfosforila e inactiva MAPK como ERK, JNK y p38 para ajustar la amplitud y la duración de la señal. Como regulador de respuesta inmediata y sensible al estrés, MKP-1 integra señales de citocinas, factores de crecimiento y estrés oxidativo para influir en la proliferación, la apoptosis, la diferenciación y la señalización inmunitaria innata. Al moldear programas transcripcionales dependientes de MAPK, incluido el crosstalk entre AP-1 y NF-κB, DUSP1 contribuye al control por retroalimentación de mediadores inflamatorios y a la adaptación celular al estrés. Se ha informado de una expresión desregulada de DUSP1 en contextos de inflamación crónica, disfunción metabólica y reprogramación de la señalización asociada al cáncer, lo que respalda su utilidad como un nodo mecanístico en estudios centrados en vías.

MKP-1/DUSP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DUSP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MKP-1/DUSP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DUSP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DUSP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MKP-1/DUSP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DUSP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MKP-1/DUSP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MKP-1/DUSP1 en células tumorales con expresión de DUSP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.