MISR II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402523

Übersicht

AMHR2 kodiert den humanen Anti-Müller-Hormon-Rezeptor Typ 2 (MISR II), eine transmembrane Serin/Threonin-Kinase, die an AMH bindet und über SMAD1/5/8 eine Signalübertragung initiiert, um Entwicklungsprogramme im Müller-Gang sowie die gonadale Differenzierung zu regulieren. Die Rezeptoraktivierung koordiniert transkriptionelle Antworten, die an Zellschicksalsentscheidungen, Gewebeumbau und der Reifung des Reproduktionstrakts beteiligt sind, und integriert sich in die umfassenderen Dynamiken der TGF-β/BMP-Signalwege. Eine fehlregulierte AMH–AMHR2-Signalgebung wurde mit Störungen der Geschlechtsentwicklung und reproduktionsendokrinologischen Phänotypen in Verbindung gebracht; zudem wurde eine veränderte MISR-II-Expression in Tumorkontexten untersucht, die von Ovarien ausgehen oder anderen Müller-Linien zuzuordnen sind. Als Knotenpunkt des Signalwegs ist AMHR2 nützlich, um ligandenabhängige Rezeptorsignalgebung, SMAD-vermittelte Genregulation sowie kontextabhängige Wachstums- und Differenzierungsantworten zu untersuchen.

Das MISR II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AMHR2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AMHR2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AMHR2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MISR II-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AMHR2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MISR II-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AMHR2-Exone abzielen, die für die MISR II-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AMHR2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MISR II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MISR II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AMHR2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MISR II HDR-Plasmid (h) und MISR II HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AMHR2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AMHR2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.