Plasmide CRISPR/Cas9 KO MISR II (h): sc-402523

Présentation

AMHR2 code le récepteur humain de l’hormone anti-müllérienne de type 2 (MISR II), une sérine/thréonine kinase transmembranaire qui se lie à l’AMH et initie une signalisation via SMAD1/5/8 afin de réguler les programmes de développement du canal de Müller et la différenciation gonadique. L’activation du récepteur coordonne des réponses transcriptionnelles impliquées dans les décisions de destin cellulaire, le remodelage tissulaire et la maturation de l’appareil reproducteur, en s’intégrant à la dynamique plus large des voies TGF-β/BMP. Une dérégulation de la signalisation AMH–AMHR2 a été associée à des troubles du développement sexuel et à des phénotypes d’endocrinologie de la reproduction, et une expression altérée de MISR II a été étudiée dans des contextes tumoraux dérivés de l’ovaire et d’autres lignages müllériens. En tant que nœud de voie, AMHR2 est utile pour explorer la signalisation récepteur dépendante du ligand, la régulation génique médiée par les SMAD et des réponses de croissance et de différenciation spécifiques au contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MISR II (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AMHR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AMHR2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AMHR2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MISR II.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AMHR2 pour l'étude de la signalisation de MISR II, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AMHR2 essentiels à la fonction de MISR II
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AMHR2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MISR II plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MISR II plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AMHR2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MISR II plasmide HDR (h) et le MISR II (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AMHR2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AMHR2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.