Plasmide CRISPR d'Activation (h) MISR II: sc-402523-ACT

AMHR2 code le récepteur de type 2 de l’hormone anti-müllérienne (MISR II), un récepteur transmembranaire sérine/thréonine kinase de la superfamille TGF-β qui relaie la signalisation initiée par l’hormone anti-müllérienne. Lors de la liaison du ligand, MISR II coopère avec des récepteurs de type I pour activer des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD qui régulent la régression des canaux de Müller durant l’embryogenèse mâle et influencent la différenciation des cellules des gonades et des voies génitales. Dans les tissus adultes, la signalisation AMH–AMHR2 contribue à la folliculogenèse ovarienne et aux décisions de destin cellulaire via un dialogue croisé dépendant du contexte avec les voies BMP/TGF-β. Une expression ou une signalisation d’AMHR2 dérégulée a été associée à des troubles du développement sexuel et est étudiée en biologie de la reproduction ainsi que dans des modèles de maladies liées au système endocrinien.

MISR II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AMHR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MISR II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AMHR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AMHR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MISR II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AMHR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MISR II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MISR II dans les cellules tumorales présentant une expression de AMHR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.