MiRP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418462

概要

KCNE2はヒトのMinK-related peptide 1（MiRP1）をコードしており、MiRP1は電位依存性カリウムチャネルの機能（KCNH2/hERGを含む）を調節する、単回膜貫通型のβサブユニットである。MiRP1はチャネルのゲーティング、トラフィッキング、膜再分極を調整することで機能に影響を与える。心筋活動電位持続時間や上皮のイオン輸送に対する作用を介して、MiRP1は心臓や消化管上皮などの組織における電気的興奮性と電解質恒常性に寄与する。KCNE2依存的なチャネル制御の破綻は、再分極予備能の変化や不整脈感受性の増大と関連し、甲状腺および胃の生理との関係でも研究されている。調節サブユニットとしてのMiRP1は、イオンチャネルの巨大分子複合体、膜タンパク質の品質管理、ならびに刺激依存的な興奮性変化を解析するための機序的な切り口を提供する。

MiRP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCNE2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCNE2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCNE2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MiRP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MiRP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCNE2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MiRP1の機能に不可欠なKCNE2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCNE2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MiRP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMiRP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCNE2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MiRP1 HDRプラスミド（h）および MiRP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCNE2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCNE2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。