MIP-3α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422839

Übersicht

Ccl20 kodiert das Chemokin „Macrophage Inflammatory Protein-3 alpha“ (MIP-3α), einen sezernierten Liganden für CCR6, der die Chemotaxis unreifer dendritischer Zellen, Gedächtnis‑T‑Zellen und B‑Zellen zu Orten epithelialer Aktivierung steuert. Durch NF‑κB und proinflammatorische Zytokine induziert, ist CCL20 an der Leukozytenmigration, der mukosalen Immunüberwachung und der Organisation entzündlicher Mikroumgebungen beteiligt. Eine fehlregulierte CCL20–CCR6‑Signalgebung wird mit chronischen Entzündungsprozessen und autoimmuner Pathobiologie in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext von Störungen der epithelialen Barrierefunktion sowie der tumorassoziierten Rekrutierung von Immunzellen untersucht. In der Maus stellt Ccl20 einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um chemokinvermittelte Zellmigration und Zytokinnetzwerke in der Immunologie‑ und Entzündungsforschung zu analysieren.

Das MIP-3α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ccl20-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ccl20-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ccl20 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MIP-3α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ccl20-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MIP-3α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ccl20-Exone abzielen, die für die MIP-3α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ccl20-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MIP-3α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MIP-3α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ccl20-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MIP-3α HDR-Plasmid (m) und MIP-3α HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ccl20-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ccl20-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.