MINK1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404966-ACT

MINK1 (misshapen-like Kinase 1) kodiert eine Serin/Threonin-Kinase der Ste20-Familie, die als MAP4K-übergeordneter Regulator der stressaktivierten MAPK-Signalübertragung fungiert, insbesondere der JNK- und p38-Wege. Es integriert Signale aus Zelladhäsion und Zytoskelettdynamik, um über eine phosphorylierungsabhängige Kontrolle nachgeschalteter Kinasen und durch Scaffold-gebundene Signalkomplexe Zellpolarität, Migration und Überleben zu modulieren. Die Aktivität von MINK1 wurde mit inflammatorischen Signalausgängen und zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht, die Programme der Proliferation und Apoptose beeinflussen. Eine dysregulierte MINK1-Signalgebung wurde in Zusammenhängen wie Tumorzellinvasivität und metastaseassoziierten Signalwegen untersucht, ebenso wie bei breiteren neuroimmunen und epithelialen Umbau-Phänotypen, die für die Krankheitsbiologie relevant sind.

MINK1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MINK1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MINK1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MINK1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MINK1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MINK1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MINK1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MINK1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MINK1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MINK1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.