Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mindin (h): sc-417294

Présentation

SPON2 code la mindine, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui agit comme molécule de reconnaissance de motifs et d’adhésion, reliant la détection immunitaire innée aux interactions cellule–matrice. La mindine se lie à des composants microbiens et à des récepteurs intégrines, favorisant le recrutement des leucocytes, l’activation des macrophages et la modulation de voies de signalisation inflammatoires telles que NF-κB et des réseaux de cytokines en aval. Dans les microenvironnements stromaux et vasculaires, SPON2 contribue à l’organisation de la matrice extracellulaire, à l’établissement de gradients chimiotactiques et à des processus de remodelage tissulaire qui influencent les interactions tumeur–système immunitaire. Une expression dérégulée de SPON2 a été rapportée dans de multiples contextes inflammatoires et oncogéniques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la surveillance immunitaire, du remodelage associé à la fibrose et de la signalisation du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mindin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SPON2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SPON2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SPON2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mindin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SPON2 pour l'étude de la signalisation de Mindin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SPON2 essentiels à la fonction de Mindin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SPON2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mindin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Mindin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SPON2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mindin plasmide HDR (h) et le Mindin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SPON2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SPON2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.