Plásmido CRISPR de Activación (h) Mig-6: sc-401922-ACT

ERRFI1 codifica el gen 6 inducible por mitógenos (Mig-6), una proteína adaptadora inducible que actúa como regulador de retroalimentación negativa de la señalización de la familia EGFR/ERBB al limitar la actividad quinasa del receptor y la salida de las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT. Mediante la modulación de la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés impulsadas por factores de crecimiento, Mig-6 contribuye al control homeostático de los programas celulares epiteliales y mesenquimales. La expresión o función alteradas de ERRFI1 se han vinculado con la desregulación de la señalización ERBB observada en la biología del cáncer y también se han estudiado en el contexto de la señalización inflamatoria, la remodelación tisular y fenotipos del desarrollo. Como nodo de vía que integra señales de receptores tirosina quinasa, Mig-6 se analiza de forma rutinaria en estudios sobre atenuación de la señal, control por retroalimentación y dependencia de factores de crecimiento.

Mig-6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ERRFI1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mig-6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ERRFI1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ERRFI1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mig-6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ERRFI1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mig-6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mig-6 en células tumorales con expresión de ERRFI1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.