Plasmide CRISPR/Cas9 KO Midnolin (m): sc-425598

Présentation

Midn (midnolin) code une protéine associée au nucléole, impliquée dans la régulation de programmes transcriptionnels et de la protéostase, avec des liens rapportés avec la différenciation neuronale et les réponses cellulaires au stress. On pense que la midnoline participe à des processus nucléaires qui influencent la biogenèse des ribosomes et le contrôle de la qualité des protéines, ce qui concorde avec son enrichissement dans le nucléole et d’autres compartiments nucléaires. Une expression altérée de MIDN a été associée à des phénotypes neurobiologiques et a été étudiée dans le contexte de la fonction des neurones dopaminergiques et de voies pertinentes pour la neurodégénérescence. Dans des modèles murins, Midn constitue un nœud d’étude exploitable pour analyser comment la signalisation nucléolaire s’articule avec la régulation génique au cours du développement et de l’adaptation au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Midnolin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Midn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Midn, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Midn à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Midnolin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Midn pour l'étude de la signalisation de Midnolin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Midn essentiels à la fonction de Midnolin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Midn pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Midnolin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Midnolin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Midn. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Midnolin plasmide HDR (m) et le Midnolin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Midn pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Midn définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.