MIC2L1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417097-ACT

Humanes CD99L2 kodiert das Zelloberflächen-Glykoprotein MIC2L1, ein Mitglied der CD99-Familie, das an der interzellulären Adhäsion und am Transport von Leukozyten über das Gefäßendothel beteiligt ist. MIC2L1 steht mit Prozessen in Zusammenhang, die die Interaktion zwischen Endothel und Immunsystem prägen, einschließlich der Regulation der Dynamik von Zell-Zell-Kontakten und der transendothelialen Migration im Kontext inflammatorischer Signalwege. Eine veränderte Expression von Molekülen der CD99-Familie wurde mit einer fehlregulierten Rekrutierung von Immunzellen und vaskulären Entzündungen in Verbindung gebracht, wodurch CD99L2 ein relevantes Ziel für die Untersuchung von Immunüberwachung, Barrierefunktion und Tumor–Stroma-Interaktionen darstellt. In der Forschung wird CD99L2 häufig in Modellen der entzündlichen Gewebeinfiltration sowie von Mikroumgebungs-Signalen untersucht, die Zellmotilität und Adhäsion beeinflussen.

MIC2L1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD99L2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MIC2L1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD99L2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD99L2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MIC2L1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD99L2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MIC2L1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MIC2L1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD99L2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.