MIB1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404769-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MIB1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MIB1 Double-Nickase-Plasmid (h) und MIB1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MIB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MIB1: sc-393551
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MIB1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404769-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MIB1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404769-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MIB1 kodiert die Mindbomb-E3-Ubiquitin-Proteinligase 1, eine E3-Ubiquitin-Ligase vom RING-Typ, die Notch-Liganden wie DLL1 und JAG1 ubiquitinyliert, um deren Endozytose und eine produktive Aktivierung des Notch-Rezeptors zu fördern. Durch die Regulation von Stärke und zeitlicher Dynamik der Notch-Signalgebung beeinflusst MIB1 Zellschicksalsentscheidungen, Differenzierung und Gewebemusterung, mit nachgelagerten Effekten auf Transkriptionsprogramme, die Proliferation und Linienfestlegung steuern. MIB1 greift zudem in die Ubiquitin–Proteasom-Homöostase sowie in endozytotische Transportwege ein, die die Rezeptor-Ligand-Dynamik an der Zelloberfläche prägen. Genetische und funktionelle Störungen von MIB1 wurden mit veränderter entwicklungsbiologischer Signalgebung und krankheitsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter Kontexte, in denen eine Fehlregulation des Notch-Signalwegs zu onkogenen und kardiovaskulären Prozessen beiträgt.
MIB1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MIB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MIB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MIB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MIB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.