MIA2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418205-ACT

Humanes MIA2 (melanoma inhibitory activity member 2) kodiert ein großes, sezerniertes bzw. ER-assoziiertes Protein, das an Proteintransportprozessen und extrazellulärmatrixbezogenen Vorgängen beteiligt ist, mit ausgeprägten funktionellen Bezügen zur Leberzellbiologie. MIA2 trägt zur Homöostase des sekretorischen Weges bei und wurde mit der Regulation zellulärer Differenzierung, Stressantworten sowie Gewebeumbauprogrammen in Verbindung gebracht, die sich mit inflammatorischen und fibrotischen Signalwegen überschneiden. Eine veränderte MIA2-Expression wurde in verschiedenen leberzentrierten Pathologien und malignitätsrelevanten Phänotypen beschrieben, was seine Nutzung als molekulares Werkzeug zur Untersuchung von Interaktionen im Tumormikromilieu und der Dynamik des sekretorischen Proteoms unterstützt. Daher ist MIA2 für mechanistische Arbeiten an sekretionsabhängigen Signalwegen, extrazellulärer Signalübertragung und krankheitsassoziierter transkriptioneller Regulation von Interesse.

MIA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MIA2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MIA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MIA2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MIA2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MIA2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MIA2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MIA2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MIA2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MIA2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.