Mi2-b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402185-ACT

CHD4 (Mi2-b) codifica uma helicase dependente de ATP que atua como subunidade central catalítica do complexo NuRD de remodelamento de cromatina e desacetilase de histonas. Ao acoplar o reposicionamento de nucleossomos à repressão transcricional, o Mi2-b ajuda a regular programas de expressão gênica específicos de linhagem, o timing de replicação do DNA e a acessibilidade da cromatina. O CHD4 participa de processos de manutenção do genoma, incluindo sinalização de dano ao DNA e escolha de vias de reparo, influenciando a progressão do ciclo celular e as respostas ao estresse de replicação. A atividade desregulada de CHD4/NuRD e alterações em CHD4 têm sido associadas a estados epigenéticos aberrantes na biologia do câncer e a fenótipos de transtornos do neurodesenvolvimento e doenças congênitas, reforçando sua relevância para estudos mecanísticos da regulação gênica dirigida pela cromatina.

Mi2-b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHD4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mi2-b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHD4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHD4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mi2-b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHD4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mi2-b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mi2-b em células tumorais com expressão de CHD4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.