MGAT2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406205-ACT

Das humane Gen **MOGAT2** kodiert **MGAT2** (Monoacylglycerol-O-Acyltransferase 2), ein Membranenzyms des endoplasmatischen Retikulums, das die Umwandlung von Monoacylglycerol und Acyl‑CoA zu Diacylglycerol katalysiert – einem zentralen Zwischenprodukt der Triacylglycerol-Synthese. Diese Aktivität verknüpft die Aufnahme von Nahrungsfetten und die zelluläre Lipidspeicherung mit übergeordneten Signal- und Regulationswegen der Glycerolipid- und Energiehomöostase und beeinflusst dabei die Bildung von Lipidtröpfchen sowie die Zusammensetzung von Membranlipiden. Ein MGAT2-abhängiger Stofffluss kann nachgeschaltete Signalwege über aus Diacylglycerol abgeleitete Lipidmediatoren modulieren und greift in metabolische Programme ein, die den Lipidumsatz in Fettgewebe und Leber prägen. Eine veränderte Regulation von MOGAT2/MGAT2 wurde mit metabolischen Phänotypen in Zusammenhang gebracht, darunter Dyslipidämie, Insulinsensitivität und Prozesse im Kontext einer Fettleber, was es für mechanistische Studien lipidgetriebener Pathophysiologie relevant macht.

MGAT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MOGAT2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MGAT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MOGAT2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MOGAT2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MGAT2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MOGAT2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MGAT2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MGAT2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MOGAT2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.