Plasmide Double Nickase (m) Mfn2/Mitofusin 2: sc-431291-NIC

Mfn2 (Mitofusine 2) est une GTPase de type dynamine ancrée dans la membrane externe mitochondriale, qui médiatise la fusion des mitochondries et contribue au maintien de l’architecture du réseau mitochondrial dans les cellules de souris. Au-delà de l’accolement des membranes, MFN2 participe aux sites de contact mitochondrie–réticulum endoplasmique, qui coordonnent la gestion du calcium, les échanges lipidiques et la bioénergétique mitochondriale, l’associant ainsi aux réponses au stress cellulaire et à la régulation métabolique. La perturbation de Mfn2 dérègle la dynamique mitochondriale et peut modifier la mitophagie, l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène et la sensibilité à l’apoptose. Ces fonctions font de Mfn2 une cible couramment utilisée dans des études sur la neurodégénérescence, les dysfonctionnements cardiométaboliques et le remodelage mitochondrial associé à l’inflammation, in vivo et dans des systèmes murins en culture.

Mfn2/Mitofusin 2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mfn2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mfn2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mfn2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mfn2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.