Plasmide CRISPR d'Activation (m) Mfn2/Mitofusin 2: sc-431291-ACT

La Mfn2 (Mitofusine 2) murine est une GTPase conservée de la membrane externe mitochondriale qui médie la fusion des mitochondries et coordonne l’architecture du réseau mitochondrial avec l’état métabolique de la cellule. Au-delà de la fusion, MFN2 contribue à l’arrimage entre le réticulum endoplasmique et les mitochondries au niveau des membranes associées aux mitochondries (MAM), modulant les échanges de calcium, le trafic lipidique et la signalisation du stress. Ces fonctions recoupent des voies qui gouvernent la phosphorylation oxydative, l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et le contrôle qualité mitochondrial, faisant de Mfn2 un nœud clé des réseaux de bioénergétique et de communication entre organites. Une activité MFN2 dérégulée et une dynamique mitochondriale altérée sont impliquées dans la neurodégénérescence, les dysfonctionnements cardiométaboliques et des phénotypes pertinents pour les neuropathies périphériques, ce qui soutient son utilisation dans des modèles mécanistiques de maladie.

Mfn2/Mitofusin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mfn2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mfn2/Mitofusin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mfn2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mfn2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mfn2/Mitofusin 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mfn2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mfn2/Mitofusin 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mfn2/Mitofusin 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Mfn2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.