Mex3c Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408878-ACT

O MEX3C humano codifica a Mex3c, uma proteína de ligação a RNA que contém domínios KH e um motivo RING finger do tipo C3H1, o qual sustenta a regulação gênica pós-transcricional por meio de ligação seletiva por sequência ao mRNA, localização e controle de estabilidade. A Mex3c participa de redes de metabolismo de RNA que influenciam programas de tradução e a diferenciação celular, conectando-a à proteostase e à adaptação de sinalização sob estados metabólicos em mudança. Entre as conexões funcionais descritas estão a regulação do turnover de mRNA e processos associados à ubiquitina que moldam o crescimento celular e respostas ao estresse. A expressão desregulada de MEX3C foi observada em assinaturas transcricionais relevantes para doenças, reforçando seu estudo em mecanismos subjacentes à disfunção metabólica e à remodelação da regulação de RNA associada ao câncer.

Mex3c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MEX3C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mex3c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MEX3C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MEX3C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mex3c. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MEX3C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mex3c no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mex3c em células tumorais com expressão de MEX3C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.