METTL5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418556

Übersicht

METTL5 kodiert eine SAM‑abhängige RNA‑Methyltransferase, die die Ablagerung von N6‑Methyladenosin (m6A) auf der 18S‑rRNA katalysiert und damit zur Ausprägung der Ribosomenstruktur und des translationalen Outputs beiträgt. Diese Modifikation wird mit der Ribosomenbiogenese und der Feinabstimmung von Programmen der Proteinsynthese in Verbindung gebracht, die Zellwachstum und Stressanpassung unterstützen. Eine veränderte Regulation der rRNA‑Methylierungsmaschinerie, einschließlich der METTL5‑Aktivität, wurde mit Änderungen der Translationskontrolle assoziiert, wie sie bei neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und krebsassoziierten Genexpressionszuständen beobachtet werden. Daher wird METTL5 in Signalwegen untersucht, die RNA‑Epigenetik mit Proteostase, Zellzyklusprogression und Differenzierung verknüpfen.

Das METTL5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des METTL5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des METTL5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von METTL5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die METTL5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von METTL5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der METTL5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf METTL5-Exone abzielen, die für die METTL5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere METTL5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom METTL5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom METTL5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des METTL5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das METTL5 HDR-Plasmid (h) und METTL5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von METTL5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten METTL5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.