METTL3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404029-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das METTL3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- METTL3 Double-Nickase-Plasmid (h) und METTL3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf METTL3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: METTL3: sc-518180
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
METTL3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404029-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
METTL3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404029-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
METTL3 kodiert den katalytischen Kern des mRNA‑N6‑Methyladenosin‑(m6A-)Methyltransferasekomplexes und arbeitet dabei mit METTL14 sowie Kofaktoren wie WTAP zusammen, um m6A‑Markierungen auf kodierenden und nichtkodierenden RNAs anzubringen. Diese RNA‑Modifikation beeinflusst die Stabilität von Transkripten, das Spleißen, den nukleären Export und die Translation und prägt damit Programme, die mit Zellzykluskontrolle, Differenzierung, Stressantworten und angeborener Immun-Signalgebung verknüpft sind. Die METTL3‑abhängige m6A‑Regulation greift in Wege des RNA‑Metabolismus und die epitranskriptomische Kontrolle der Genexpression ein, einschließlich der Modulation von Signaloutputs wie MAPK-, PI3K–AKT- und DNA‑Schadensantwort‑Netzwerken durch ein verändertes Schicksal der mRNA. Eine fehlregulierte METTL3‑Aktivität wurde mit vielfältigen krankheitsrelevanten Phänotypen in der Krebsbiologie, Hämatopoese und in entzündlichen Kontexten in Verbindung gebracht, wodurch METTL3 häufiges Ziel mechanistischer Studien zur RNA‑basierten Regulation ist.
METTL3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des METTL3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von METTL3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die METTL3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit METTL3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.