Plasmide CRISPR d'Activation (bovine) METTL3: sc-437359-ACT

METTL3 code le cœur catalytique du complexe de méthyltransférase de l’ARN N6‑méthyladénosine (m6A), un régulateur épitranscriptomique majeur du devenir des ARNm et des ARN non codants dans les cellules bovines. En déposant des marques m6A, METTL3 influence l’épissage de l’ARN, l’export nucléaire, l’efficacité de traduction et la stabilité des transcrits, en s’intégrant à des voies qui gouvernent la progression du cycle cellulaire, les programmes de différenciation, les réponses au stress et la signalisation de l’immunité innée. Une activité altérée de METTL3 est largement associée à des réseaux d’expression génique dérégulés et à des phénotypes pertinents pour la transformation oncogénique, la signalisation inflammatoire et des anomalies du développement chez diverses espèces. Dans les modèles biomédicaux et comparatifs bovins, la modulation de METTL3 soutient des études mécanistiques du contrôle de l’état cellulaire et des circuits de régulation génique dépendants de la méthylation de l’ARN.

METTL3 Le plasmide d'activation CRISPR (bovine) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

METTL3 Le plasmide d'activation CRISPR (bovine) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de METTL3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de METTL3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie METTL3 dans les cellules tumorales présentant une expression de silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.