Metaxin 2 Double Nickase Plasmid (m): sc-424699-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Metaxin 2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Metaxin 2 Double-Nickase-Plasmid (m) und Metaxin 2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Mtx2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Metaxin 2: sc-514231
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Metaxin 2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424699-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Metaxin 2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424699-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Mtx2* kodiert Metaxin 2, ein Protein der äußeren Mitochondrienmembran, das zum Import mitochondrialer Proteine beiträgt, indem es den Aufbau und die Funktion der Translokase der äußeren Membran (TOM)-Maschinerie unterstützt. Metaxin 2 hilft, die mitochondriale Proteostase, Membranintegrität und eine effiziente Biogenese aufrechtzuerhalten und beeinflusst dadurch die oxidative Phosphorylierung sowie den allgemeinen zellulären Energiestoffwechsel. Störungen der mitochondrialen Importwege können Stressantworten auslösen, die Anfälligkeit für Apoptose verändern und sekundäre Effekte auf den Lipidstoffwechsel sowie die angeborene Signalübertragung haben. Als Bestandteil der mitochondrialen Homöostase wird MTX2 routinemäßig in Modellen mitochondrialer Dysfunktion untersucht, die für Neurodegeneration, metabolische Phänotypen und die Empfindlichkeit gegenüber zellulärem Stress relevant sind.
Metaxin 2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Mtx2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Mtx2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Mtx2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Mtx2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.