Metaxin 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405083-ACT

MTX2 kodiert Metaxin 2, eine Komponente der äußeren Mitochondrienmembran des Metaxin/SAM-Komplexes, die die Sortierung und Insertion von β-Fass-Proteinen unterstützt und zum mitochondrialen Proteinimport beiträgt. Über seine Rolle in der Biogenese der Mitochondrienmembran und der Homöostase des Organells beeinflusst MTX2 die Kapazität der oxidativen Phosphorylierung, die mitochondriale Morphologie sowie Stressantworten, die mit Apoptose und Proteostase verknüpft sind. Störungen von Import- und Membranassemblierungswegen in Mitochondrien sind breit relevant für die Biologie neuromuskulärer und neurodegenerativer Erkrankungen sowie für das metabolische Remodeling von Krebszellen. MTX2 ist daher nützlich, um Mechanismen zu untersuchen, die die Organisation der äußeren Mitochondrienmembran mit zellulärem Überleben, Energiestoffwechsel und der Qualitätskontrolle von Organellen koppeln.

Metaxin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MTX2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Metaxin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MTX2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MTX2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Metaxin 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MTX2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Metaxin 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Metaxin 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MTX2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.