Plasmide CRISPR d'Activation (h) MetAP-2: sc-402529-ACT

Le gène humain METAP2 code la méthionine aminopeptidase 2 (MetAP-2), une métalloprotéase cytosolique qui retire la méthionine initiatrice des polypeptides naissants, une étape clé du traitement N‑terminal pouvant influencer la stabilité des protéines, leur localisation et l’acétylation N‑terminale en aval. Par son rôle dans la maturation co‑traductionnelle des protéines, MetAP-2 contribue à la protéostasie et affecte des programmes de croissance couplés à la traduction ainsi que la progression du cycle cellulaire. L’activité de METAP2 a été associée à des voies qui gouvernent la capacité proliférative et l’adaptation au stress cellulaire, ce qui la rend pertinente pour des études mécanistiques de la croissance dérégulée en oncologie et pour l’exploration de phénotypes métaboliques et angiogéniques. Une expression ou une fonction altérée de METAP2 peut donc constituer un nœud d’interrogation pour comprendre comment le traitement N‑terminal s’interface avec les réseaux de signalisation et l’aptitude cellulaire.

MetAP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de METAP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MetAP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus METAP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription METAP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MetAP-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus METAP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MetAP-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MetAP-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de METAP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.