Metallothionein 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421733

Übersicht

Mt3 kodiert Metallothionein 3 (MT3), ein cysteinreiches, metallbindendes Protein, das die intrazelluläre Verfügbarkeit von Zink und Kupfer reguliert und zur zellulären Abwehr gegen oxidativen und elektrophilen Stress beiträgt. Durch das Puffern redoxaktiver Metalle und die Beeinflussung zinkabhängiger Signalwege kann MT3 Prozesse modulieren, die mit der Homöostase reaktiver Sauerstoffspezies, der Proteostase und der Mitochondrienfunktion verknüpft sind. In Mausgeweben ist die MT3-Expression besonders im Nervensystem ausgeprägt; dort wurde sie im Zusammenhang mit neuronaler Differenzierung, synaptischer Funktion und metallassoziierter Neurotoxizität untersucht. Eine fehlregulierte Metallhandhabung und oxidative Stressmechanismen unter Beteiligung von MT3 sind relevant für Modelle der Neurodegeneration sowie für entzündungsassoziierte Gewebeschädigungen.

Das Metallothionein 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Mt3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Mt3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Mt3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Metallothionein 3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Mt3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Metallothionein 3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Mt3-Exone abzielen, die für die Metallothionein 3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Mt3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Metallothionein 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Metallothionein 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Mt3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Metallothionein 3 HDR-Plasmid (m) und Metallothionein 3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Mt3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Mt3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.