Particules Lentivirales d'Activation (h) Metallothionein 2A: sc-410889-LAC

MT2A code la métallothionéine 2A, une protéine riche en cystéines qui lie les métaux, tamponne le zinc et le cuivre intracellulaires et contribue à la détoxification de métaux toxiques tels que le cadmium et le mercure. En régulant l’homéostasie des ions métalliques et l’équilibre rédox, MT2A influence les réponses au stress oxydatif, la fonction mitochondriale et des programmes transcriptionnels médiés par des facteurs dépendants des métaux. L’expression de MT2A répond aux signaux inflammatoires et de stress, notamment aux voies antioxydantes pilotées par NRF2, et peut moduler l’apoptose ainsi que la survie cellulaire en situation de stress toxique ou métabolique. Une activité et une expression dérégulées de MT2A ont été associées à la biologie des cancers, à des troubles métaboliques et hépatiques, ainsi qu’à des mécanismes neurodégénératifs où la dyshoméostasie des métaux et les dommages oxydatifs sont prédominants.

Les particules d'activation lentivirales Metallothionein 2A (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MT2A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Metallothionein 2A (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MT2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Metallothionein 2A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MT2A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.