Partículas Lentivirales de Activación (h) Met: sc-400101-LAC

El gen MET humano codifica el receptor tirosina quinasa Met, el receptor de alta afinidad para el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF). Tras la unión del ligando, Met sufre autofosforilación y activa señales aguas abajo a través de las vías PI3K–AKT, RAS–MAPK, STAT y SRC/FAK para regular la proliferación, la supervivencia, la motilidad, las transiciones epitelio‑mesénquima y la morfogénesis tisular. La desregulación de MET mediante amplificación, sobreexpresión, mutación o estimulación aberrante por HGF se asocia con programas de crecimiento invasivo y con alteraciones en las interacciones célula–microambiente relevantes para la oncología y la biología del desarrollo. In vitro, la señalización de MET se estudia con frecuencia por su papel en la migración, la señalización angiogénica y la reconfiguración de redes asociada a la resistencia.

Las partículas de activación lentiviral Met (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MET en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Met (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MET, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Met. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MET y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.