Menin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402759

Übersicht

MEN1 kodiert Menin, ein überwiegend nukleäres Gerüstprotein, das durch Interaktionen mit Histon-modifizierenden Enzymen und sequenzspezifischen Transkriptionsfaktoren die Transkriptionsregulation und den Chromatinzustand koordiniert. Menin ist eng mit der epigenetischen Kontrolle von Genexpressionsprogrammen verknüpft, die Zellzyklusprogression, Differenzierung und Genomstabilität steuern, einschließlich Signalwegen, die mit MLL/COMPASS-Komplexen und anderen chromatinassoziierten Regulatoren verbunden sind. Eine Störung von MEN1 beeinträchtigt die Homöostase endokriner Zelllinien und Transkriptionsnetzwerke, die mit der Tumorsuppressorbiologie in Zusammenhang stehen. Als kontextabhängiger Regulator wird Menin umfassend hinsichtlich seiner Effekte auf hormonproduzierende Gewebe, DNA-Schadensantworten und die Genauigkeit der Transkription untersucht.

Das Menin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MEN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MEN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MEN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Menin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MEN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Menin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MEN1-Exone abzielen, die für die Menin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MEN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Menin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Menin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MEN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Menin HDR-Plasmid (h) und Menin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MEN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MEN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.