Plasmide CRISPR d'Activation (h) MEK-2: sc-402732-ACT

MAP2K2 code pour MEK‑2, une kinase MAPK à double spécificité qui phosphoryle et active ERK1/2 afin de relayer des signaux dépendants des mitogènes et des facteurs de croissance. En tant que nœud central de la cascade RAS–RAF–MEK–ERK, MEK‑2 régule la progression du cycle cellulaire, la différenciation, la survie et des programmes transcriptionnels adaptatifs, en intégrant des signaux issus des récepteurs à activité tyrosine kinase ainsi que des signaux de stress. La dérégulation de l’activité de MAP2K2/MEK‑2 contribue à une sortie anormale de la voie ERK, impliquée dans la signalisation oncogénique, des troubles du développement et des réponses inflammatoires altérées. Dans des systèmes modèles humains, la modulation de MAP2K2 est couramment utilisée pour étudier la dynamique de la voie, le contrôle par rétroaction et les interactions croisées avec les voies PI3K/AKT et JNK/p38.

MEK-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP2K2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MEK-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP2K2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP2K2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MEK-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP2K2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MEK-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MEK-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP2K2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.